การล้อมเกาะมอลตาครั้งใหญ่เกิดขึ้นในปี ค.ศ. 1565 เมื่อ จักรวรรดิออตโตมัน พยายามยึดครองเกาะมอลตา ซึ่งในขณะนั้นถูกยึดครองโดย อัศวินฮอสปิทัลเลอร์การปิดล้อมกินเวลาเกือบสี่เดือน ตั้งแต่วันที่ 18 พฤษภาคม ถึง 11 กันยายน ค.ศ. 1565Knights Hospitaller มีสำนักงานใหญ่ในมอลตาตั้งแต่ปี 1530 หลังจากถูกพวกออตโตมานขับไล่ออกจากโรดส์ในปี 1522 หลังจากการปิดล้อมโรดส์พวกออตโตมานพยายามยึดมอลตาเป็นครั้งแรกในปี 1551 แต่ล้มเหลวในปี ค.ศ. 1565 สุลต่านสุไลมานผู้ยิ่งใหญ่ สุลต่านออตโตมัน ได้พยายามยึดมอลตาเป็นครั้งที่สองอัศวินซึ่งมีจำนวนประมาณ 500 นายพร้อมกับทหารราบประมาณ 6,000 นาย ยืนหยัดต่อการปิดล้อมและขับไล่ผู้รุกรานชัยชนะครั้งนี้ได้กลายเป็นหนึ่งในเหตุการณ์ที่โด่งดังที่สุดของยุโรปในศตวรรษที่ 16 จนถึงจุดที่วอลแตร์กล่าวว่า "ไม่มีอะไรจะรู้ดีไปกว่าการล้อมเกาะมอลตา"ไม่ต้องสงสัยเลยว่ามีส่วนทำให้เกิดการกัดเซาะการรับรู้ของชาวยุโรปในเรื่องการอยู่ยงคงกระพันของออตโตมันในที่สุด แม้ว่าทะเลเมดิเตอร์เรเนียนจะยังคงถูกโต้แย้งระหว่างพันธมิตรที่นับถือศาสนาคริสต์และชาวเติร์กมุสลิมเป็นเวลาหลายปีการล้อมเป็นจุดไคลแม็กซ์ของการแข่งขันที่ทวีความรุนแรงขึ้นระหว่างพันธมิตร คริสเตียน และจักรวรรดิออตโตมันอิสลามเพื่อควบคุมทะเลเมดิเตอร์เรเนียน การแข่งขันที่รวมถึงการโจมตีมอลตาของตุรกีในปี ค.ศ. 1551 การทำลายล้างกองเรือคริสเตียนที่เป็นพันธมิตรของออตโตมันในยุทธการที่เจรบาใน ค.ศ. 1560 และความพ่ายแพ้อย่างเด็ดขาดของออตโตมันในยุทธการเลปันโตในปี ค.ศ. 1571