המצור הגדול על מלטה התרחש בשנת 1565 כאשר האימפריה העות'מאנית ניסתה לכבוש את האי מלטה, אז הוחזק על ידי האבירים ההוספיטלרים .המצור נמשך כמעט ארבעה חודשים, מ-18 במאי עד 11 בספטמבר 1565.מטה האבירים ההוספיטלר היה במלטה מאז 1530, לאחר שגורשו מרודוס, גם הם על ידי העות'מאנים, ב-1522, בעקבות המצור על רודוס.העות'מאנים ניסו לראשונה לכבוש את מלטה בשנת 1551 אך נכשלו.בשנת 1565, סולימאן המפואר, הסולטן העות'מאני, עשה ניסיון שני לכבוש את מלטה.האבירים, שמנו כ-500 יחד עם כ-6,000 חיילים רגלים, עמדו במצור והדפו את הפולשים.ניצחון זה הפך לאחד האירועים המפורסמים ביותר של אירופה של המאה השש עשרה, עד כדי כך שוולטר אמר: "שום דבר אינו ידוע יותר מהמצור על מלטה".זה ללא ספק תרם לשחיקה בסופו של דבר של התפיסה האירופית של אי-מנוצחיות עות'מאנית, אם כי הים התיכון המשיך להיות מתמודד בין קואליציות נוצריות לבין הטורקים המוסלמים במשך שנים רבות.המצור היה שיאו של תחרות הסלמה בין הבריתות הנוצריות לבין האימפריה העות'מאנית האסלאמית על השליטה בים התיכון, תחרות שכללה את המתקפה הטורקית על מלטה ב-1551, השמדת צי נוצרי בעלות הברית בקרב ג'רבה ב-1551. 1560, והתבוסה העות'מאנית המכריעה בקרב לפנטו ב-1571.