16ویں صدی میں، پروٹسٹنٹ اصلاحی تحریکوں نے پولش عیسائیت میں گہرا اثر ڈالا اور پولینڈ میں اس کے نتیجے میں ہونے والی اصلاح میں متعدد مختلف فرقوں کو شامل کیا گیا۔اس وقت پولینڈ میں مذہبی رواداری کی پالیسیاں یورپ میں تقریباً انوکھی تھیں اور بہت سے لوگ جو مذہبی جھگڑوں کی وجہ سے پھٹے ہوئے علاقوں سے فرار ہو گئے تھے انہوں نے پولینڈ میں پناہ لی۔بادشاہ سگسمنڈ اول اولڈ (1506–1548) اور بادشاہ سگسمنڈ II آگسٹس (1548–1572) کے دور میں ثقافت اور سائنس (پولینڈ میں نشاۃ ثانیہ کا سنہری دور) کا مشاہدہ کیا گیا، جس میں ماہر فلکیات نکولس کوپرنیکس (1473) -1543) سب سے مشہور نمائندہ ہے۔جان کوچانووسکی (1530–1584) ایک شاعر اور اس دور کی اہم فنکارانہ شخصیت تھے۔1525 میں، سگسمنڈ I کے دور حکومت میں، ٹیوٹونک آرڈر کو سیکولرائز کیا گیا اور ڈیوک البرٹ نے پولش بادشاہ (پرشین ہومیج) کے سامنے اپنی جاگیر، ڈچی آف پرشیا کے لیے خراج عقیدت پیش کیا۔مازویا کو بالآخر 1529 میں پولش کراؤن میں مکمل طور پر شامل کر لیا گیا۔سگسمنڈ II کے دور حکومت نے جیگیلونین دور کا خاتمہ کیا، لیکن اس نے یونین آف لوبلن (1569) کو جنم دیا، جو لتھوانیا کے ساتھ اتحاد کی حتمی تکمیل تھی۔اس معاہدے نے یوکرین کو لتھوانیا کے گرینڈ ڈچی سے پولینڈ منتقل کر دیا اور پولش – لتھوانیائی سیاست کو ایک حقیقی اتحاد میں تبدیل کر دیا، اور اسے بے اولاد سگسمنڈ II کی موت سے آگے محفوظ رکھا، جس کی فعال شمولیت نے اس عمل کی تکمیل کو ممکن بنایا۔انتہائی شمال مشرق میں لیوونیا کو پولینڈ نے 1561 میں شامل کیا تھا اور پولینڈ نے روس کے زارڈم کے خلاف لیوونین جنگ میں حصہ لیا تھا۔پھانسی کی تحریک، جس نے پولینڈ اور لتھوانیا کے بڑے خاندانوں کے ذریعے ریاست کے بڑھتے ہوئے تسلط کو روکنے کی کوشش کی، 1562-63 میں Piotrków میں Sejm میں عروج پر پہنچ گئی۔مذہبی محاذ پر، پولش برادران کیلونسٹوں سے الگ ہو گئے، اور پروٹسٹنٹ بریسٹ بائبل 1563 میں شائع ہوئی۔