马耳他大围攻发生于 1565 年，当时奥斯曼帝国试图征服当时由医院骑士团控制的马耳他岛。从1565年5月18日到9月11日，围困持续了近四个月。医院骑士团自 1530 年以来一直将总部设在马耳他，1522 年，同样是被奥斯曼帝国围困罗德岛之后，医院骑士团被驱逐出罗德岛。1551 年，奥斯曼帝国首次尝试占领马耳他，但失败了。1565年，奥斯曼苏丹苏莱曼大帝第二次尝试占领马耳他。骑士团人数约 500 人，加上约 6,000 名步兵，顶住了围攻，击退了入侵者。这次胜利成为十六世纪欧洲最著名的事件之一，以至于伏尔泰说：“没有什么比围攻马耳他更广为人知的了。”尽管多年来基督教联盟和穆斯林土耳其人继续争夺地中海，但它无疑最终削弱了欧洲对奥斯曼帝国不可战胜的看法。这次围攻是基督教联盟与伊斯兰奥斯曼帝国之间争夺地中海控制权的不断升级的高潮，这场争夺包括 1551 年土耳其对马耳他的进攻、1551 年奥斯曼帝国在杰尔巴岛战役中摧毁一支基督教联盟舰队。 1560 年，以及 1571 年勒班陀战役中奥斯曼帝国的决定性失败。