Në shekullin e 16-të, lëvizjet reformuese protestante bënë depërtime të thella në krishterimin polak dhe Reformimi që rezultoi në Poloni përfshiu një sërë emërtimesh të ndryshme.Politikat e tolerancës fetare që u zhvilluan në Poloni ishin pothuajse unike në Evropë në atë kohë dhe shumë që u larguan nga rajonet e copëtuara nga grindjet fetare gjetën strehim në Poloni.Mbretërimi i Mbretit Sigismund I i Vjetër (1506-1548) dhe Mbretit Sigismund II Augustus (1548-1572) dëshmuan një kultivim intensiv të kulturës dhe shkencës (një epokë e artë e Rilindjes në Poloni), nga të cilat astronomi Nikolaus Koperniku (1473). –1543) është përfaqësuesi më i njohur.Jan Kochanowski (1530-1584) ishte një poet dhe personaliteti kryesor artistik i periudhës.Në 1525, gjatë mbretërimit të Sigismund I, Urdhri Teutonik u laicizua dhe Duka Albert kreu një akt homazh para mbretit polak (Homazhi Prusian) për feudin e tij, Dukatin e Prusisë.Mazovia më në fund u përfshi plotësisht në kurorën polake në 1529.Sundimi i Sigismund II i dha fund periudhës Jagielloniane, por krijoi Bashkimin e Lublinit (1569), një përmbushje përfundimtare e bashkimit me Lituaninë.Kjo marrëveshje transferoi Ukrainën nga Dukati i Madh i Lituanisë në Poloni dhe e shndërroi politikën polako-lituaneze në një bashkim të vërtetë, duke e ruajtur atë përtej vdekjes së Sigismund II pa fëmijë, përfshirja aktive e të cilit bëri të mundur përfundimin e këtij procesi.Livonia në verilindjen e largët u përfshi nga Polonia në 1561 dhe Polonia hyri në Luftën Livoniane kundër Cardomit të Rusisë .Lëvizja ekzekutive, e cila u përpoq të kontrollonte dominimin progresiv të shtetit nga familjet magnat të Polonisë dhe Lituanisë, arriti kulmin në Sejm në Piotrków në 1562–63.Në frontin fetar, Vëllezërit polakë u ndanë nga kalvinistët dhe Bibla Protestante Brest u botua në 1563. Jezuitët, të cilët mbërritën në vitin 1564, ishin të destinuar të bënin një ndikim të madh në historinë e Polonisë.