През 16 век протестантските реформаторски движения навлизат дълбоко в полското християнство и произтичащата от това Реформация в Полша включва редица различни деноминации.Политиките на религиозна толерантност, които се развиват в Полша, са почти уникални в Европа по това време и много, които бягат от региони, раздирани от религиозни борби, намират убежище в Полша.Управлението на крал Сигизмунд I Стари (1506–1548) и крал Сигизмунд II Август (1548–1572) е свидетел на интензивно култивиране на културата и науката (златен век на Ренесанса в Полша), от които астрономът Николай Коперник (1473 г.) –1543) е най-известният представител.Ян Кохановски (1530–1584) е поет и водеща артистична личност на периода.През 1525 г., по време на управлението на Сигизмунд I, Тевтонският орден е секуларизиран и херцог Алберт извършва акт на почит пред полския крал (пруската почит) за неговия феод, Херцогство Прусия.Мазовия най-накрая е напълно включена в Полската корона през 1529 г.Управлението на Сигизмунд II сложи край на Ягелонския период, но даде началото на Люблинската уния (1569 г.), окончателно изпълнение на унията с Литва.Това споразумение прехвърля Украйна от Великото литовско херцогство на Полша и трансформира полско-литовското държавно устройство в реален съюз, запазвайки го след смъртта на бездетния Сигизмунд II, чието активно участие направи възможно завършването на този процес.Ливония в далечния североизток е включена от Полша през 1561 г. и Полша влиза в Ливонската война срещу царството на Русия .Движението на екзекуционистите, което се опитва да спре прогресивното господство на държавата от магнатските фамилии на Полша и Литва, достига своя връх в Сейма в Пьотркув през 1562–63 г.На религиозния фронт полските братя се отделят от калвинистите и протестантската Брестка Библия е публикувана през 1563 г. Йезуитите, които пристигат през 1564 г., са предназначени да окажат голямо влияние върху историята на Полша.