In die 16de eeu het Protestantse Hervormingsbewegings diep spore in die Poolse Christendom gemaak en die gevolglike Hervorming in Pole het 'n aantal verskillende denominasies behels.Die beleid van godsdienstige verdraagsaamheid wat in Pole ontwikkel het, was op daardie tydstip byna uniek in Europa en baie wat uit streke gevlug het wat deur godsdienstwis verskeur is, het skuiling in Pole gevind.Die bewind van koning Sigismund I die Oue (1506–1548) en koning Sigismund II Augustus (1548–1572) was getuie van 'n intense verbouing van kultuur en wetenskap ('n Goue Era van die Renaissance in Pole), waarvan die sterrekundige Nicolaus Copernicus (1473) –1543) is die bekendste verteenwoordiger.Jan Kochanowski (1530–1584) was 'n digter en die voorste artistieke persoonlikheid van die tydperk.In 1525, tydens die bewind van Sigismund I, is die Teutoniese Orde gesekulariseer en hertog Albert het 'n eerbetoon voor die Poolse koning (die Pruisiese huldeblyk) vir sy leen, die Hertogdom Pruise, uitgevoer.Mazovië is uiteindelik in 1529 volledig by die Poolse Kroon ingelyf.Die bewind van Sigismund II het die Jagielloniese tydperk beëindig, maar het aanleiding gegee tot die Unie van Lublin (1569), 'n uiteindelike vervulling van die unie met Litaue.Hierdie ooreenkoms het die Oekraïne van die Groothertogdom Litaue na Pole oorgeplaas en die Pools-Litaus staat in 'n ware unie omskep, wat dit bewaar het na die dood van die kinderlose Sigismund II, wie se aktiewe betrokkenheid die voltooiing van hierdie proses moontlik gemaak het.Livonia in die verre noordooste is in 1561 deur Pole ingelyf en Pole het die Livonian Oorlog teen die Tsardom van Rusland betree.Die teregstellingsbeweging, wat gepoog het om die voortgaande oorheersing van die staat deur die magnaatfamilies van Pole en Litaue te keer, het in 1562–63 'n hoogtepunt bereik by die Sejm in Piotrków.Op die godsdienstige front het die Poolse Broeders van die Calviniste geskei, en die Protestantse Brest-Bybel is in 1563 gepubliseer. Die Jesuïete, wat in 1564 aangekom het, was bestem om 'n groot impak op Pole se geskiedenis te maak.