Na die oorlog van 1547–49 met die Toungoo het Ayutthaya-koning Maha Chakkraphat sy hoofstad se verdediging opgebou ter voorbereiding van 'n latere oorlog met die Birmaanse.Die oorlog van 1547–49 het geëindig in 'n Siamese verdedigingsoorwinning en het Siamese onafhanklikheid bewaar.Bayinnaung se territoriale ambisies het Chakkraphat egter aangespoor om vir nog 'n inval voor te berei.Hierdie voorbereidings het 'n sensus ingesluit wat alle bekwame mans voorberei het om oorlog toe te gaan.Wapens en vee is deur die regering geneem ter voorbereiding van 'n grootskaalse oorlogspoging, en sewe wit olifante is vir goeie geluk deur Chakkraphat gevang.Nuus van die Ayutthayan-koning se voorbereiding het vinnig versprei en uiteindelik die Birmaanse bereik.Bayinnaung het daarin geslaag om die stad Chiang Mai in die nabygeleë Lan Na-koninkryk in 1556 in te neem. Daaropvolgende pogings het die grootste deel van noordelike Siam onder Birmaanse beheer gelaat.Dit het Chakkraphat se koninkryk in 'n bedenklike posisie gelaat, gekonfronteer met vyandelike gebied in die noorde en die weste.Bayinnaung het daarna twee van koning Chakkraphat se wit olifante geëis as huldeblyk aan die opkomende Toungoo-dinastie.Chakkraphat het geweier, wat gelei het tot Birma se tweede inval in die Ayutthaya-koninkryk.Die Bayinnaung-leërs het afgetrek na Ayutthaya.Daar is hulle weke lank in die baai gehou deur die Siamese fort, bygestaan ​​deur drie Portugese oorlogskepe en artilleriebatterye by die hawe.Die indringers het uiteindelik op 7 Februarie 1564 die Portugese skepe en batterye gevang, waarna die fort dadelik geval het.^[43] Met 'n nou 60 000 sterk mag gekombineer met die Phitsanulok-leër, het Bayinnaung Ayutthaya se stadsmure bereik en die stad hewig gebombardeer.Alhoewel meerderwaardig in sterkte was, was die Birmaanse nie in staat om Ayutthaya te vang nie, maar het geëis dat die Siamese koning onder 'n vlag van wapenstilstand uit die stad kom vir vredesonderhandelinge.Aangesien sy burgers die beleg nie veel langer kon neem nie, het Chakkraphat vrede beding, maar teen 'n hoë prys.In ruil vir die terugtrekking van die Birmaanse leër, het Bayinnaung prins Ramesuan (Chakkraphat se seun), Phraya Chakri en Phraya Sunthorn Songkhram saam met hom na Birma teruggeneem as 'n gyselaar, en vier Siamese wit olifante.Mahathamraja, hoewel 'n verraaier, sou gelaat word as heerser van Phitsanulok en onderkoning van Siam.Die Ayutthaya-koninkryk het 'n vasal van die Toungoo-dinastie geword, wat vereis word om jaarliks ​​dertig olifante en driehonderd katte silwer aan die Birmaanse te gee.