Kufuatia vita vya 1547-49 na Toungoo, mfalme wa Ayutthaya Maha Chakkraphat alijenga ulinzi wa mji mkuu wake katika kujiandaa kwa vita vya baadaye na Waburma.Vita vya 1547-49 vilimalizika kwa ushindi wa kujihami wa Siamese na kuhifadhi uhuru wa Siamese.Hata hivyo, matarajio ya eneo la Baynnaung yalisababisha Chakkraphat kujiandaa kwa uvamizi mwingine.Maandalizi haya yalijumuisha sensa iliyotayarisha wanaume wote wenye uwezo wa kwenda vitani.Silaha na mifugo zilichukuliwa na serikali kwa maandalizi ya juhudi kubwa za vita, na tembo saba weupe walikamatwa na Chakkraphat kwa bahati nzuri.Habari za maandalizi ya mfalme wa Ayutthayan zilienea haraka, hatimaye zikawafikia Waburma.Baynnaung alifaulu kuliteka jiji la Chiang Mai katika ufalme wa karibu wa Lan Na mwaka wa 1556. Jitihada zilizofuata ziliacha sehemu kubwa ya kaskazini mwa Siam chini ya udhibiti wa Waburma.Hili liliuacha ufalme wa Chakkraphat katika hali ya hatari, ukikabiliwa na eneo la adui kaskazini na magharibi.Bayinnaung baadaye alidai tembo weupe wawili wa Mfalme Chakkraphat kama ushuru kwa Nasaba ya Toungoo inayokua.Chakkraphat alikataa, na kusababisha uvamizi wa pili wa Burma katika Ufalme wa Ayutthaya.Majeshi ya Baynnaung yalishuka hadi Ayutthaya.Huko, walizuiliwa kwa majuma kadhaa na ngome ya Siamese, ikisaidiwa na meli tatu za kivita za Ureno na betri za mizinga kwenye bandari.Wavamizi hatimaye walikamata meli na betri za Ureno mnamo 7 Februari 1564, baada ya hapo ngome hiyo ikaanguka mara moja.^[43] Kwa sasa kikosi chenye nguvu 60,000 kikiunganishwa na jeshi la Phitsanulok, Bayinnaung ilifikia kuta za jiji la Ayutthaya, na kulishambulia jiji hilo kwa nguvu.Ingawa walikuwa na nguvu zaidi, Waburma hawakuweza kukamata Ayutthaya, lakini walidai kwamba mfalme wa Siamese atoke nje ya jiji chini ya bendera ya makubaliano ya mazungumzo ya amani.Kuona kwamba raia wake hawakuweza kuchukua kuzingirwa kwa muda mrefu zaidi, Chakkraphat alijadili amani, lakini kwa bei ya juu.Kwa kubadilishana na jeshi la Burma kurudi nyuma, Bayinnaung alimchukua Prince Ramesuan (mtoto wa Chakkraphat), Phraya Chakri, na Phraya Sunthorn Songkhram kurudi naye Burma kama mateka, na tembo wanne weupe wa Siamese.Mahathamraja, ingawa alikuwa msaliti, alipaswa kuachwa kama mtawala wa Phitsanulok na makamu wa Siam.Ufalme wa Ayutthaya ukawa kibaraka wa Enzi ya Toungoo, unaohitajika kuwapa Waburma tembo thelathini na paka mia tatu za fedha kwa Waburma.